专利摘要显示,本发明公开了一种小麦籽粒硬度基因型鉴定方法及应用,属于农业生物技术领域。该分子标记通过Pina-KB引物组扩增得到,Pina-KB引物组包括引物pina-D1b-F1、引物pina-D1b-F2和引物pina-D1b-R1。本发明利用Pina-D1b等位基因从Pina编码区的第23个碱基开始缺失15380bp片段设计KASP标记,该KASP分子标记可以快速、精准地在多个小麦样品中进行Pina-D1b基因型的检测,具有高通量、简便、灵敏度高和特异性强的优点,适用于鉴定小麦Pina-D1b基因型和小麦品质改良的分子标记辅助育种。